Diferentes estudios estiman que entre el 15% y el 20% de las líneas celulares que están actualmente en uso podrían no ser la línea celular que está documentada ¿Quiénes son estos invasores «among us»? La contaminación cruzada son células, de otras líneas, que se adaptan mejor a las condiciones de cultivo y, por lo tanto, crecen más rápido que las células originales y, poco a poco, pueden llegar a reemplazarlas por completo en el cultivo.
Nombre común:
Células eucariotas (contaminación cruzada).
Tamaño:
de 10 a 30 μm.
¿Qué són?
Células eucariotas en un cultivo celular diferentes a las que queremos cultivar.
¿De dónde proceden?
Generalmente de otros cultivos presentes en el mismo laboratorio.
¿Cómo detectarlos?
Pruebas de identificación o autenticación celular.
¿Qué armas tenemos frente a ellas?
Controles periódicos. Aplicación estricta de las buenas prácticas de cultivo celular.
Qué es la contaminación cruzada
La contaminación cruzada entre las líneas celulares se refiere a la contaminación con células diferentes a las que queremos cultivar. Varios estudios estiman que entre el 15% y el 20% de las líneas celulares que están actualmente en uso podrían no ser la línea celular que está documentada.
Las células “contaminantes” son células que se adaptan mejor a las condiciones de cultivo y, por lo tanto, crecen más rápido que las células originales y, poco a poco, pueden llegar a reemplazarlas por completo en el cultivo.
La falta de controles de identidad celular y el hecho de que muchas de las células utilizadas en los laboratorios se obtienen de otros laboratorios sin hacer pruebas, contribuyen a este problema.
Afortunadamente, las colecciones de cultivos establecidas se han vuelto más proactivas en la cuestión de la identidad de las líneas celulares. A principios de 2012 se constituyó el ICLACC (International Cell Line Authentication Commitee) a partir de una iniciativa de ATCC y otros bancos celulares internacionales. El objetivo principal de la ICLACC es estandarizar métodos de control y mantener actualizada una base de datos de líneas mal identificadas. En base a estas recomendaciones cada vez más revistas científicas solicitan datos de certificación de autenticidad antes de publicar resultados de una línea celular en concreto.
Detección de la contaminación cruzada
Trabajar con células bien identificadas evita pérdida de tiempo y dinero, resultados no reproducibles y pérdida de credibilidad.
Aunque el análisis morfológico de las células es necesario, debido a las similitudes físicas externas de diferentes líneas celulares, no se puede confiar solamente en el análisis a través del microscopio óptico para la detección de la contaminación cruzada en los cultivos.
La ICLACC recomienda realizar periódicamente una serie de controles tipo, como controles de crecimiento por curvas de crecimiento y controles de cariotipo mediante análisis citogenéticos.
También son importantes los estudios de autenticación, que consisten en la verificación de la especie a la que pertenece esa línea celular e incluso el tipo específico de célula. Para estos estudios se pueden utilizar diferentes técnicas, dos de las más frecuentes son:
PCR multiplex
Se analiza un pequeño segmento de citocromo oxidasa I mitocondrial para el que cada especie presenta una banda característica, y por tanto, permite detectar contaminaciones interespecie.
STR (Short Tandem Repeat)
Es el método más recomendado para líneas humanas y se basa en que cada línea celular posee un perfil alélico propio que se compara con bases de datos de los bancos certificados. Sirve para autenticar y detectar contaminación intraespecie.
Importancia de la autenticidad en el cultivo celular
Las primeras descripciones de líneas celulares mal identificadas y contaminadas se dan en 1968 y desde esa fecha la comunidad científica ha seguido manifestando su preocupación por las consecuencias sobre los resultados obtenidos.
Las células contaminadas con otras células pueden ser utilizadas en investigaciones durante meses o incluso años sin saberlo. Durante este tiempo la validez de los resultados obtenidos se ve comprometida y, en paralelo, la reputación de los investigadores que las han utilizado.
Se recomienda hacer identificación de líneas celulares en las siguientes situaciones: si el fenotipo de la línea celular no corresponde con el descrito, antes de realizar una nueva serie de experimentos o de la publicación de resultados, antes de congelar las células para almacenarlas y trimestralmente si la línea celular se cultiva activamente.
Curiosidades de la contaminación cruzada
Contaminación cruzada y deriva genética
Además de la contaminación cruzada, otra de las causas de la falta de “autenticidad” en las células en cultivo es la deriva genética a la que están expuestas las células, cuya probabilidad aumenta cuanto más tiempo permanecen en cultivo.
Errores y accidentes
Los accidentes en los laboratorios son la principal causa de las contaminaciones cruzadas en los cultivos celulares, como el etiquetado incorrecto o los errores en el manejo de los frascos.