Las levaduras son uno de los supervillanos que atacan en nuestros cultivos celulares. Su contaminación pronto se hace visible al microscopio y casi se las puede ver multiplicándose en sus típicos racimos. Si esto sucede, tendremos que combatirlas con antifúngicos para salvar a nuestras células.
Nombre común:
Levadura.
Tamaño:
de 6 a 8 μm.
¿Qué són?
Tipo de hongo microscópico, generalmente unicelular.
¿De dónde proceden?
De los sistemas de ventilación y del agua de los baños e incubadores.
¿Cómo detectarlos?
Por observación directa en el microscopio óptico.
¿Qué armas tenemos frente a ellas?
Antifúngicos.
Características de la contaminación por levaduras
La fuente inicial de contaminación de un cultivo con levaduras suele ser el aire, por lo que es muy importante controlar el funcionamiento y limpieza de los sistemas de ventilación del cuarto de cultivos.
Las levaduras también tienen una gran capacidad para colonizar el agua del incubador y del baño termostatizado, es importante utilizar agua estéril y añadirle soluciones antifúngicas para evitar que sean fuente de propagación de levaduras.
En algunas ocasiones, las levaduras también pueden proceder de la piel del personal que trabaja con las células.
En las primeras etapas de la contaminación de un cultivo celular por levaduras son difíciles de detectar, aún no son evidentes al microscopio y no se suelen detectar cambios de pH en el medio. Sin embargo, con el paso del tiempo, el medio de cultivo se vuelve turbio a simple vista y cambia el pH.
En los frascos de cultivo, las levaduras se propagan como células individuales que se dividen por gemación o división directa y crecen rápidamente en los cultivos celulares, incluso con tiempos de duplicación de menos de 12 horas.
Al microscopio óptico las levaduras se ven como partículas redondas u ovoides brillantes, que aparecen separadas o en cadenas de dos a cuatro o más partículas. Su tamaño es mayor que el de las bacterias, pero inferior a las células típicas de mamíferos. Cuando las levaduras se replican mediante gemación se puede observar fácilmente estas cadenas con ramificaciones formando la típica estructura en racimo.
Tratamiento de cultivos contaminados con levaduras
La contaminación por levaduras es una de las más sencillas de solucionar. Para ello se suelen utilizar dos antifúngicos, la anfotericina B y la nistatina.
La anfotericina se utiliza a concentraciones finales entre 0,25 y 2,5 μg/ml. Es importante empezar el tratamiento de descontaminación del cultivo celular con concentraciones bajas de este antifúngico porque puede ser tóxico para algunos tipos de células. La anfotericina en el medio de cultivo puede observarse como pequeñas partículas con forma de cristales.
La concentración necesaria de nistatina para la descontaminación de un cultivo celular suele estar entre 100 y 250 U/ml y, generalmente se presenta como una solución coloidal por lo que debe mezclarse muy bien antes de ser añadida al medio de cultivo.
Curiosidades
Amenaza estacional
La contaminación con levaduras suele aumentar la frecuencia en primavera y verano. Aún así, es una de las contaminaciones menos frecuentes en los cultivos celulares.
Velocidad de crucero
Las células de levaduras se multiplican más rápido que las células de mamíferos, pero más lentamente que las bacterias. Normalmente la contaminación se hace evidente bajo el microscopio después de 2-3 días de cultivo.
No sirven los antibióticos
Los antibióticos, como la penicilina y la estreptomicina utilizados habitualmente en los medios de cultivo celular, NO son eficaces para la eliminación de las levaduras.